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    ELISA试剂盒选择原则及质控标准

    目前市场上的 ELISA 试剂盒质量参差不齐,试剂盒数以千计,供应商的科研实力也相差悬殊,试剂盒的质量好坏会严重影响到检测结果的准确性。因此如何去挑选适合自己的试剂盒就显得特别重要。

    以下为归纳ELISA试剂盒选择需考虑的要素,供科研朋友们参考。


     

    1. 十大选择原则

    1.1 基于研究物种选择

    如果样品来自经典模型,如人、小鼠和大鼠,则可以相对轻松地找到经过验证的ELISA试剂盒。但如果样品来自猴子等非经典模型,则可获得的商品ELISA试剂盒数量有限。

    如果要检测这些物种的指标,最好要对待检物(如有种属差异性)进行同源性分析以及试剂盒的种属交叉反应数据进行分析。


    1.2 基于分析目的选择

    ELISA是一种可用于定性和定量分析的工具。定性ELISA为样品提供简单的阳性或阴性结果,而定量ELISA通过标准曲线反映样品中分析物的浓度。您想要量化样品中的分析物还是仅检测样品的存在与否?根据分析目的,您可以选择定性ELISA或定量ELISA。


    1.3 基于检测样本选择

    大多数商业ELISA试剂盒在血清/血浆和细胞培养上清液中得到验证。请务必详细阅读产品说明书,以确保该产品与样品兼容。此外,其他因素如溶血和样品中脂质的存在会干扰分析性能。因此,在选择ELISA试剂盒之前,请考虑这些因素。建议对样品进行预实验,以验证试剂盒是否合适且对样品是否敏感。


    1.4 基于检测范围选择

    试剂盒的检测范围就是标曲范围,特别要注意待测样本浓度是否落在标曲范围内,对于浓度很高的样本,可以先进行预实验摸索到比较好的稀释倍数后再大量测定样本。

    在此之前,我们可以通过NCBI的文献,uniprot,pax-dab上给出的蛋白表达量参考值来比较ELISA试剂盒中给出的样本值与报道值是否一致。


    1.5 基于样本量选择

    商业化试剂盒的样品用量通常需要10μL至100μL, 如果您的样品很珍贵或较难获取,则需要认真考虑试剂盒对样品用量的要求。如果样品量少,最好选择需要较少量样品的ELISA试剂盒。


    1.6 基于文献引用选择

    产品的文献引用特别是高质量的 SCI 文章的引用是很多客户都关心的问题,这是业界对产品认可的一个非常重要指标,而且对相关用户的科研有一定的借鉴作用。

    CUSABIO试剂盒的客户引用文献,目前已达10,000余篇,并以每年数百篇的数量在增长。

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    1.7 基于售前售后服务选择

    在市场经济条件下,服务理念已逐渐被企业家所重视,企业的营销环境发生了巨大的变化,高科技的广泛应用,信息高速流动,产品硬件标准趋同。对客户所能提供的技术支持服务、问题处理的及时性、客户的满意度等也是选择产品的考虑因素。


    1.8 基于美誉度选择

    一个品牌不光要有知名度,更重要的是美誉度。从同行或实验室同僚了解供应商的口碑,也通过行业调查公司以及网络,相关宣传资料等可以找到美誉度高的ELISA试剂盒供应商,在一定程度上可以反映产品的质量问题。


    1.9 基于成本预算选择

    国际公认的知名品牌一般质量可靠,文献引用多。但国际品牌由于进口和国际运输等成本较高,因此售价也较高。其实优质国产品牌也是不错的选择,因省去不少物流和报关费用,与国外进口试剂盒相比价格上有较大的优惠,而且能提供比较灵活的包装规格, 如48T小包装,非常适合中国国情。


    1.10 基于关键技术参数选择

    如需选取新的 ELISA 试剂盒,首先需要仔细评估检测性能。重要参数包括灵敏度、动态范围以及精度,这些在多数的 ELISA 试剂盒说明书中都有体现。对于典型样品类型而言,其它参数对 ELISA 性能更具预测价值。

    十大选择原则

     

    2. 八大质控标准

    华美生物CUSABIO ELISA试剂盒是试剂配备完整、质控严格、经过验证的即用型ELISA试剂盒。在研发的过程中,采取多个严控的步骤以保证试剂盒的卓越品质,保证提供给客户的产品具有线性、特异性、稳定性和灵敏度等的高标准。

    本小节旨在为您解读不同参数,以帮助您的样品找到最合适的 ELISA 试剂盒。

    2.1 线性范围

    通过线性范围,我们可以计算出实际的检测样本值。

    以CSB-E07270h(人脂联素(ADP)ELISA Kit)为例的标准曲线。

    ng/ml OD1 OD2 Average Corrected
    100 2.839 2.897 2.868 2.718
    50 1.968 1.974 1.971 1.821
    25 1.144 1.192 1.168 1.018
    12.5 0.709 0.733 0.721 0.571
    6.25 0.433 0.450 0.441 0.291
    3.125 0.303 0.301 0.302 0.152
    1.562 0.242 0.223 0.233 0.083
    0 0.149 0.151 0.150  

    2.2 线性

    样本经梯度稀释后检测分析即为线性分析。

    线性是试剂盒准确度和特异性的判定标准。为了评估测定的线性,在各种基质中加入高浓度分析物的样品,并用样品稀释剂稀释以产生具有在测定的动态范围内的值的样品。

    以CSB-E07270h(人脂联素(ADP)ELISA Kit)为例:

    血清样品在1:100,1:200,1:400,1:800下稀释。

    细胞培养物上清液在1:1,1:2,1:4,1:8下稀释。

    测试值在80-120%之间并显示出良好的线性。

      Sample Serum(n=4)
    1:100 Average( %) 91
    Range ( %) 85-97
    1:200 Average( %) 97
    Range ( %) 91-103
    1:400 Average( %) 93
    Range ( %) 85-95
    1:800 Average( %) 95
    Range ( %) 90-100
      Sample Cell Culture Supernates(n=4)
    1:1 Average( %) 97
    Range ( %) 80-100
    1:2 Average( %) 95
    Range ( %) 91-110
    1:4 Average( %) 90
    Range ( %) 85-95
    1:8 Average( %) 96
    Range ( %) 90-100

    2.3 最低检测限

    最低检测限是灵敏度的测试指标。由使用的抗体效价等决定的,在研发过程中,一般会优化保证高灵敏度、低背景的检测结果从而大大提高试剂盒的灵敏度。检测限越低,灵敏度越高


    2.4 精确度

    CV (%) 或变异系数代表了测定的一致性,即同一样本重复测定的符合程度。

    一般是选取同一批次或者不同批次的试剂盒对不同浓度的样本进行定量检测,需要尽量降低批次差异带来的系统误差,保证相同样本结果的重复性。

    应考虑两种类型的精度:批内精确度和批间精确度。

    批内精确度:主要指一次实验内不同孔之间的可重复性。

    在一个平板上测试三个已知浓度的样品20次,以评估CSB-E07270h(人脂联素(ADP)ELISA Kit)的精确度:CV%<8%。

    批间精确度:主要指不同实验间结果的可重复性。

    在20个测定中测试三个已知浓度的样品以评估CSB-E07270h(人脂联素(ADP)ELISA Kit)的精确度:CV%<10%。

      Intra-Assay Precision Inter-Assay Precision
    Sample 1 2 3 1 2 3
    n 20 20 20 20 20 20
    Mean(ng/ml) 13.215 12.894 13.438 12.897 13.109 12.963
    SD 0.63 0.37 0.53 1.10 0.81 1.00
    CV(%) 4.75 2.847 3.931 8.562 6.145 7.741

    2.5 特异性

    特异性是ELISA试剂盒的关键指标。主要受到不同物种间的高同源性蛋白、靶蛋白配体或靶蛋白受体的干扰。

    CUSABIO选择具有高特异性的原料,以确保ELISA试剂盒的优异特异性,分析交叉反应和干扰,确认只能识别和检测目标分析物。


    2.6 回收率

    回收率=靶蛋白的测定浓度/添加的靶蛋白浓度*100%

    它反映了样品分析过程中分析物的损失程度,回收率越高,准确度越高。

    回收实验可检测试剂盒是否受干扰因子的影响,以不添加蛋白的天然样本基质为空白对照,回收率应介于80%-120%,表明试剂盒的性能较好。

    以CSB-E07270h(人脂联素,ADP ELISA试剂盒)为例的回收率。

    Sample Type Average(%) Range(%)
    Serum (n=5) 95 89-98
    EDTA plasma (n=4) 97 90-100

    2.7 稳定性

    稳定性越好,存储时间越长。

    通常采用加速降解的方法来推断试剂盒的有效期。通常试剂盒在37℃放置一天折合有效期2个月,实际工作中,一般将试剂盒在37℃破坏3-7天后,然后检测上述指标,观察是否在范围内。也可留样至有效期后进行检验,来衡量有效期,对于批量大的指标,可将加速降解和留样检验相结合的方法。

    将CUSABIO ELISA试剂盒的主要原料和测定板在37℃下热损伤测试7天,然后与在4℃下储存的原料进行比较。 7天后,OD值≤30%,这是合格的。


    2.8 天然样本验证

    避免使用有外源性污染的样本,避免血样本出现溶血、细菌污染,最好使用较新鲜样本,避免反复冻融。

    CUSABIO ELISA试剂盒可以检测天然样品,根据靶点性质对天然样本进行选择(血清,血浆、细胞上清等),为客户提供最真实的实验数据参考

    以CSB-E07270h(人脂联素(ADP)ELISA Kit)为例,我们在之前以1:500稀释度测试血清和血浆样品,测试值为S3-S5。



    1v1周青梅郑宣木天寥
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