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蛋白質控

華美生物所有蛋白產品都會經過嚴格的質量控制,包括蛋白質的濃度測定、純度測定、分子量檢測、內毒素檢測、蛋白質活性檢等。蛋白質質量控制的流程圖如下:

1. 蛋白濃度測定

蛋白質濃度檢測的方法有bradford法、BCA法、A280法,根據緩沖成本選擇合的檢測方法,其中最常用的為bradford法,濃度檢測的范圍為1-5mg/ml。Bradford法標準曲線如下圖所示:

2. 蛋白分子量檢測

蛋白質分子量檢測采用考馬斯亮藍顯色結合SDS-PAGE檢測,分子質量跟氨基酸序列推測的理論分子質量一致。重組小鼠 Calreticulin(Calr)蛋白理論分子質量為73.3KD,其檢測結果如下:

3. 蛋白質純度檢測

蛋白質純度檢測采用考馬斯亮藍顯色SDS-PAGE分離蛋白,通過bandscan軟件分析蛋白質的純度,蛋白質的純度需達到90%。

4. 蛋白內毒素檢測

內毒素檢測采用 LAL方法,內毒素含量低于1 EU / μg。

5. 蛋白質活性檢測

蛋白質活性檢測有ELISA方法,細胞活性檢測,酶活性檢測方法三種方法,其中受體蛋白主要采用ELISA方法,細胞因子類蛋白采用細胞活性檢測法,酶類采用活性檢測方法。

Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized ACKR1 at 1 μg/ml can bind human CCL2, the EC50 of human CCL2 protein is 48.64-60.24 μg/ml.

Measured in a cytotoxicity assay using L 929 mouse fibroblast cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The ED50 for this effect is 33.32-47.38 pg/ml

6. 測序

蛋白質質譜鑒定是蛋白質組學研究的核心技術之一,是鑒定蛋白質的主要方法。質譜分析可分為兩類:MALDI-TOF和LC-MS / MS,其中,LC-MS / MS具有更高的靈敏度和幾乎100%的可靠性,這是文獻中最常用的方法。目前,從蛋白質樣品混合物中鑒定單一蛋白是蛋白質研究中的一個核心問題。分離蛋白質混合物有兩種常用方法:二維凝膠電泳(2-DE)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE,十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳)。

現今,華美生物的蛋白質凝膠條和凝膠點鑒定已經形成了一套成熟的流程,主要包括通過一維或二維電泳獲得目標蛋白條帶和斑點,并連續優化凝膠內酶解方法,然后通過LC-MS / MS分析獲得蛋白質碎裂芯片電荷,峰圖和其他相關信息。該方法可以顯著提高質譜鑒定的成功率和蛋白質凝膠消化中肽的覆蓋率。


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